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如何调配MEM培养基?小编告诉你
  • 发布日期:2020-04-16      浏览次数:1191
    •   MEM培养基是动物细胞培养中的常用的培养基,主要是贴壁细胞的培养,修改配方后也可用于其他类型细胞培养,例如如无钙(Ca)MEM培养基可被用于悬浮细胞的培养,而MEM培养基可被用于二倍体细胞的培养。
        配方
        1.配置前准备:配置培养基新制备的milli water。调节pH值的酸碱溶液也应该使用这种水配置。制备培养基的器皿清洗干净,并用milli water润洗两次。
        2.溶解培养基:取5%终体积的milli water,加入到1L玻璃杯中,将干粉培养基倒入烧杯,水洗包装袋内面两次,倒入培养液中。磁力搅拌助溶。
        3.补加试剂:根据包装袋说明加入NaHCO3(2.2g),HEPES(2.383,10mmol)、非必需氨基酸(可不加,10ml)。
        4.加抗生素:一般抗生素终浓度--青霉素100U/ml,链霉素100U/ml。1L加入10m储备液。
        5.调pH值:加水到1000ml,然后用HCL或者NaOH调节pH到7.2。
        6.过滤除菌:采用0.22um滤膜。过滤后分装于小瓶中(100或200ml)。过滤后pH值一般上升0.1-0.3。
        7.加小牛血清:根据MEM培养基配置的量将小牛血清分装,冷冻保存(-20度)。临用前将加入小牛血清10%。
        使用说明
        1、保存在2-8度干燥环境,避光。
        2、称量出比终容积小5%的蒸馏水,混合的容器尽可能接近终容积。
        3、将干粉加入到室温15到30度的水中,轻柔搅拌,勿用热水。
        4、冲洗出包装袋内所有干粉。
        5、每升培养基加入2.2g碳酸氢钠。
        6、用水稀释至终的容积,搅拌直至溶解。不要过分混合。
        7、调整pH值比后的培养用的pH值要低0.2到0.3(过滤后pH值一般要升高0.1 到0.3):用1N NaOH 和 1N HCl,边搅拌边缓慢添加。调整pH值完毕后,封闭容器,直至过滤。
        8、立即用膜滤过消毒。
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